O'simlik moddalarida kolonizatsiyalangan zang qo'ziqorinlarining DNKini qanday olish mumkin?

Bu har qanday o'simlik moddasida kolonizatsiya qilingan zangli qo'ziqorinlardan DNKni olish tartibini tasvirlaydi. Yakuniy mahsulot - bu asosan qo'ziqorin DNKi va PCR amplifikatsiyasida ishlatilishi mumkin bo'lgan eritmada ozgina miqdorda o'simlik DNK aralashmasidir. Ilgari nam-laboratoriya tajribasi kutilmoqda. Ishlab chiqaruvchining protokoliga moslashtirilgan.
Lysing Matrix C naychalariga 25-25mg zararlangan bargli to'qima (bosh barmog'i kattaligi) va 20-25mg diatomli tuproq (tish pichog'ining qisqichi) qo'shing.
Namunalarni MP FastPrep 24 homogenizatoriga 20 soniya davomida 4 tezlikda joylashtiring.
Proteinaz K bilan 600μL Genomik Lizis Tamponini qo'shing. Tez aralashtiring, tez aralashtiring.
60 ° C (140 ° F) da 1 soat davomida inkübe qiling. Aralashtirish uchun har 15 daqiqada aylantiring.
Xona haroratiga qadar salqin.
200 mlL xloroform qo'shing. Aralashtirishga aylantiring.
Eng yuqori tezlikda 10 daqiqa davomida aylantiring.
Supernatantni (yuqori qatlam) toza 1,5 ml naychaga o'tkazing. Oldingi naychani tashlash.
DNKni sindiradigan eritmani qo'shing. Aralashtirishga aylantiring.
60 ° C (140 ° F) da 1 soat davomida inkübe qiling.
Tezda, 5 daqiqaga muz ustiga qo'ying.
100 mL yog'ingarchilik eritmasini qo'shing. Aralashtirishga aylantiring. Agar oq cho'kma hosil bo'lmasa, unga 50 ml qo'shing
5 daqiqa davomida eng yuqori tezlik bilan aylantiring.
Palafni bezovta qilmasdan, g'ayritabiiy vositani toza 1,5 ml naychaga o'tkazing. Oldingi naychani tashlash.
5 ll Mussel Glikogen va 500 mk Isopropanol qo'shing.
Aralashtirish uchun kamida 50 marta aylantiring.
Eng yuqori tezlikda 10 daqiqa davomida aylantiring. Siz naychalarni bir xil yo'nalishda joylashtirishni xohlashingiz mumkin, shuning uchun tsentrifugatsiyadan keyin pelet har doim bir tomonda bo'ladi.
Pastki qismida kichik pellet bo'lishi kerak. DNK peletini to'kib yubormaslik uchun juda ehtiyotkorlik bilan g'ayritabiiyni to'kib tashlang. Agar pellet bo'lmasa, qazib olishni qayta urinib ko'rishingiz kerak.
Pelletga 100 mL TE bufer qo'shing. Agar pellet o'z-o'zidan eritmaga tushmasa, 37 daqiqa davomida (99 ° F) 5 daqiqa davomida inkübe qiling.
DNK olish jarayoni tugallandi. Agar siz agarozli gelda DNKning sifatini / miqdorini baholashni xohlashingiz mumkin.
PCRda foydalanish uchun: DNK ekstraktsiyasini 1:10 seyreltini tayyorlang. Agar bu ishlamasa, 1: 100 ni sinab ko'ring. DNKning haddan tashqari ko'pligi PCR reaktsiyasiga to'sqinlik qilishi mumkin.
benumesasports.com © 2020